Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе» Российской академии медицинских наук

         ОТЧЕТ

Определение антимикробной активности (МПК) испытуемых соединений нанодисперстного нульвалентного серебра (дисперсии наночастиц серебра) производства ООО НПП «Сентоза Факторинг НП» в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

1. Штаммы, участвующие в работе

   В работе использовались музейные штаммы ATCC (American Type Culture Collection):

   Грамположительных:

Staphylococcus aureus 25923 ATCC^*

Staphylococcus epidermidis 12228 АТСС

Streptococcus pneumoniae 49619 ATCC

Enterococcus faecalis 29212 ATCC

Грамотрицательных:

Escherichia coli 25922 ATCC

Klebsiella pneumoniae 13883 ATCC

Salmonella cholera-suis 14028 ATCC

Pseudomonas aeruginosa 27853 ATCC

2. Среды, используемые в работе

         Питательные среды: бульон для определения МПК готовили из сухой среды (Mueller Hinton broth, Acumedia, Baltimore) и стерилизовали автоклавированием при 121^оС в течение 15 минут.

         Для культивирования Staphylococcus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella cholerasuis использовали готовую сухую среду – Триптиказо-соевый агар (Trypticase Soy Agar, BBL). Для культивирования Enterococcus использовали готовую сухую среду - Колумбийский агар (Columbia Agar Base, BBL). Среды стерилизовали автоклавированием при 121^оС в течение 15 минут.

Метод определения противомикробного действия веществ

а. Приготовление растворов изучаемых соединений:

         Основные растворы испытуемых соединений готовили ex tempore, полученный раствор затем разводили водой до концентрации 128 мкг/мл. В качестве препаратов сравнения использовали мирамистин 0,01% и хлоргексидин 0,05%.

б. Приготовление бактериального инокулюма:

         Для приготовления инокулюма использовали чистую, суточную культуру грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, выросших на плотной питательной среде, соответствующей для каждого типа микроорганизмов. В стерильном изотоническом растворе хлорида натрия готовили взвесь микроорганизмов, доводя плотность инокулюма до 0,5 по стандарту МакФарланда (1,5х10⁸ КОЕ/мл). Затем полученный инокулят разводили до концентрации 5х10⁵ КОЕ/мл бульоном Мюллера-Хинтон. Инокулюм использовали в течение 15 минут после приготовления; чистота бактериальных штаммов контролировалась перед каждым экспериментом.

в. Постановка эксперимента:

         В работе использовали микрометод определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) методом серийных разведений в бульоне Мюллера-Хинтон с использованием 96 – луночных стерильных планшетов.

         В лунки каждого планшета вносили по 100 мкл бульона Мюллера-Хинтон; в первую лунку вносили испытуемое соединение в концентрации 128 мкг/мл в объеме 100 мкл и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,125 мкг/мл. Затем в каждую лунку вносили приготовленный инокулюм, разводя тем самым вдвое концентрацию изучаемых соединений. Каждый препарат в эксперименте титровали дважды. В качестве контроля включали лунки, не содержащие тестируемых препаратов (контроль роста культуры). Кроме того ставился контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 36⁰С в течение 24 часов.

Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая видимый рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест - соединений с ростом культуры без них.

         За МПК принимали минимальную концентрацию исследуемых соединений, обеспечивающую полное подавление видимого роста исследуемых штаммов микроорганизмов.

Полученные результаты: Полученные результаты представлены в таблице.

Таблица 1. Определение МПК (в мкг/мл) испытуемых серебросодержащих соединений в сравнении мирамистином и хлоргексидином в отношении Staphylococcus aureus ATCC 25923 и Escherichia coli ATCC 25922.

Выводы:

Исследуемые образцы (8339, 8401 и 8403) проявляют выраженную активность в отношении Staphylococcus aureus и Escherichia coli, сравнимую с активностью хлоргексидина и повиаргола.

Таблица 2. Определение МПК (в мкг/мл) испытуемого серебросодержащего соединения (8403) в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Выводы:

Испытуемое серебросодержащее соединение № 8403 (Биологически активная добавка к пище «Коллоидное серебро Аджента») проявляет выраженную активность в отношении Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Специфическая активность в отношении Enterococcus faecalis и Salmonella cholera-suis выражена чуть слабее.

Заключение:

Образцы нанодисперстного нульвалентного серебра (дисперсии наночастиц серебра) производства компании ООО НПП «Сентоза Факторинг НП» проявляют выраженную (в разной степени) специфическую активность в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Для испытания специфической активности были выбраны наиболее часто встречающиеся в клиниках микроорганизмы, поэтому выраженная специфическая активность серебросодержащих соединений имеет большое значение т.к. это позволяет использовать их в качестве терапевтических средств при лечении многих бактериальных инфекций.